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ELISA試劑盒的使用簡單而又不簡單
點擊次數(shù):770 更新時間:2019-03-21
  ELISA試劑盒的使用簡單而又不簡單
  elisa試劑盒是一種敏感性高,重復性好,特異性強的實驗診斷方法。因為它試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,在免疫學檢驗的各領(lǐng)域中已經(jīng)得到了廣泛的使用。
  在進行ELISA試劑盒實驗時,各項條件的選擇也是非常重要的:
  (1)、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體,在使用前進行篩選:在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應的均一性如何,以此來判斷其吸附性能是否良好。
 ?。?)、包被抗體的選擇:將抗體吸附在固相載體表面的時候,一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度,進行包被后,當其它試驗條件大致一樣的情況下,觀察陽性標本的OD值。選擇蛋白量少,OD值大的濃度。
 ?。?)、酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法”在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定濃度。
 ?。?)、ELISA試劑盒后還有酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、而本身無色。在進行試驗時要注意號防護措施,因為有些供氫體有可能存在著的致癌作用。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體。等底物作用了一段時間后,加入強酸堿的物質(zhì)終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制。
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